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ELISA實驗方法之捕獲包被法檢測抗體


發布日期:[2019-07-16] 共閱[392]次

    前面給大家介紹的ELISA實驗幾大常見方法,不知道您掌握多少了呢?如果沒有掌握那也沒有關系,可以去瀏覽之前發布的文章哦!我司提供技術在線指導,如您有技術問題,也可前來咨詢我司技術人員!今天是常見方法的zui后一篇了,主要解析的是捕獲包被法檢測抗體和捕獲包被法檢測抗體,具體內容請往下看!

    捕獲包被法檢測抗體

    捕獲包被法(亦稱反向間接法)ELISA,主要用于血清中某種抗體亞型成分(如IgM)的測定。以目前常用的IgM測定為例,因血清中針對某種抗原的特異性IgM和IgG同時存在,則后者可干擾IgM的測定。因此先將所有血清IgM(包括異性IgM和非特異性IgM)固定在固相上,在去除IgG后再測定特異性IgM。IgM抗體的檢測用于傳染病的早期診斷中。先用抗人IgM抗體包被固相,以捕獲血清標本中的IgM(其中包括針對抗原的特異性IgM抗體和非特異性的IgM)。然后加入抗原,此抗原僅與特異性IgM相結合。繼而加酶標記針對抗原的特異性抗體。再與底物作用,呈色即與標本中的IgM成正相關。此法常用于病毒性感染的早期診斷。類風濕因子(RF)同樣能干擾捕獲包被法測定IgM抗體,導致假陽性反應。因此中和IgG的間接法近來頗受青睞,用這類試劑檢測抗CMV IgGM和抗弓形蟲IgM抗體已獲成功。

    捕獲法測抗體的簡要操作步驟:
    1)特異性捕獲抗體的包被,先把能特異性結合待測抗原的抗體固定于固相載體表面;
    2)加入待測樣品,通過固定在載體表面的針對該抗原的抗體固定于載體表面;
    3)加入特異性抗原以及針對該特異性抗原的酶標抗體;
    4)加入酶促反應底物,發生顯色反應,顯色的深淺與待測抗體的量成正比。

    捕獲包被法檢測抗體

    近年在親和素-生物素系統上又發展出ABS-ELISA法 。親和素是一種糖蛋白,每個分子由4個能和生物素結合的亞基組成,生物素為小分子化合物。用化學方法制成的衍生物素-羥基琥珀酰亞胺酯可與抗體或酶形成生物素標記產物,標記方法頗為簡便,并且不影響抗體或酶原有的生物學活性。親和素生物素系統,簡稱ABS(avidin-biotin system)。由于親和素與生物素間的親和力極強,結合迅速,且極其穩定,使BAS標記技術比常規酶聯免疫、放射免疫及熒光免疫技術有著更高的靈敏度,為微量抗原、抗體的檢測開辟了新的途徑,大大提高了檢測的靈敏度,但該方法比普通ELISA多用了兩種試劑,增加了操作步驟,因此在臨床檢驗中ABS-ELISA應用不多。ABS-ELISA法可分為酶標記親和素-生物素(LAB)法和橋聯親和素-生物素(ABC)法兩種類型。兩者均以生物素標記的抗體(或抗原)代替原ELISA系統中的酶標抗體(抗原)。

    在LAB法中,將特異性抗體生物素化、酶分子標記在親和素分子上,生物素化抗體與被檢抗原結合后,再借BAS的高度親和力將酶分子聯結到抗原分子上,經酶促反應即可檢出抗原,因此提高檢測的敏感度。

    ABC法同樣將特異性抗體生物素化、酶分子標在生物素上,親和素和酶標生物素需要先按一定比例形成ABC復合物,這種網絡結構結合了大量的酶分子,當親和素尚未被酶標生物素飽和時,生物素化抗體即可與之結合, 使被檢抗原、生物素化抗體和酶標生物素聯成一體。

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